DELLA-proteïnen binne konservearre mastergroeiregulatorsdy't in sintrale rol spylje by it kontrolearjen fan plantûntwikkeling yn reaksje op ynterne en miljeu-sinjalen. DELLA fungearret as in transkripsjonele regulator en wurdt rekrutearre nei doelpromotors troch te binen oan transkripsjefaktoaren (TF's) en histon H2A fia syn GRAS-domein. Resinte stúdzjes hawwe oantoand dat DELLA-stabiliteit post-translasjoneel regele wurdt troch twa meganismen: polyubiquitinaasje feroarsake troch it fytohormoan gibberelline, wat liedt ta syn rappe degradaasje, en konjugaasje fan lytse ubiquitine-achtige modifikatoaren (SUMO) om syn opgarjen te ferheegjen. Derneist wurdt DELLA-aktiviteit dynamysk regele troch twa ferskillende glykosylaasjes: de DELLA-TF-ynteraksje wurdt fersterke troch O-fukosylaasje, mar ynhibearre troch O-keppele N-acetylglucosamine (O-GlcNAc) modifikaasje. De rol fan DELLA-fosforylaasje bliuwt lykwols ûndúdlik, om't eardere stúdzjes tsjinstridige resultaten hawwe sjen litten, fariearjend fan dyjingen dy't sjen litte dat fosforylaasje DELLA-degradaasje befoarderet of ferminderet oant oaren dy't sjen litte dat fosforylaasje syn stabiliteit net beynfloedet. Hjir identifisearje wy fosforylaasjeplakken yn REPRESSORga1-3(RGA, AtDELLA) suvere út Arabidopsis thaliana troch massaspektrometry-analyze en litte sjen dat fosforylaasje fan twa RGA-peptiden yn 'e PolyS- en PolyS/T-regio's H2A-binding befoarderet en RGA-aktiviteit ferbetteret. Assosjaasje fan RGA mei doelpromotors. It is opmerklik dat fosforylaasje gjin ynfloed hat op RGA-TF-ynteraksjes of RGA-stabiliteit. Us stúdzje lit it molekulêre meganisme sjen wêrmei't fosforylaasje DELLA-aktiviteit ynducearret.
Om de rol fan fosforylaasje yn it regeljen fan DELLA-funksje te ferdúdlikjen, is it kritysk om DELLA-fosforylaasjeplakken yn vivo te identifisearjen en funksjonele analyses yn planten út te fieren. Troch affiniteitssuvering fan plantenekstrakten folge troch MS/MS-analyze, hawwe wy ferskate fosfositen yn RGA identifisearre. Under omstannichheden fan GA-tekoart nimt RHA-fosforylaasje ta, mar fosforylaasje beynfloedet de stabiliteit net. Wichtich is dat ko-IP- en ChIP-qPCR-assays oantoanden dat fosforylaasje yn 'e PolyS/T-regio fan RGA syn ynteraksje mei H2A en syn assosjaasje mei doelpromotors befoarderet, wat it meganisme oantoant wêrmei't fosforylaasje RGA-funksje ynducearret.
RGA wurdt rekrutearre om doelwitchromatine te berikken troch de ynteraksje fan it LHR1-subdomein mei TF en bindt dan oan H2A fia syn PolyS/T-regio en PFYRE-subdomein, wêrtroch it H2A-RGA-TF-kompleks foarmet om RGA te stabilisearjen. Fosforylaasje fan Pep 2 yn 'e PolyS/T-regio tusken it DELLA-domein en it GRAS-domein troch in net-identifisearre kinase fersterket de RGA-H2A-binding. It rgam2A-mutantprotein skaft RGA-fosforylaasje ôf en nimt in oare proteinkonformaasje oan om de H2A-binding te bemuoien. Dit resulteart yn destabilisaasje fan tydlike TF-rgam2A-ynteraksjes en dissosiaasje fan rgam2A fan doelwitchromatine. Dizze figuer toant allinich RGA-bemiddelde transkripsjonele represje. In ferlykber patroan koe wurde beskreaun foar RGA-bemiddelde transkripsjonele aktivearring, útsein dat it H2A-RGA-TF-kompleks de transkripsje fan it doelgen soe befoarderje en defosforylaasje fan rgam2A de transkripsje soe ferminderje. Figuer oanpast fan Huang et al.21.
Alle kwantitative gegevens waarden statistysk analysearre mei Excel, en wichtige ferskillen waarden bepaald mei de Student's t-test. Der waarden gjin statistyske metoaden brûkt om de stekproefgrutte foarôf te bepalen. Der waarden gjin gegevens útsletten fan 'e analyze; it eksperimint wie net willekeurich; de ûndersikers wiene net blyn foar de ferdieling fan gegevens tidens it eksperimint en de evaluaasje fan 'e resultaten. De stekproefgrutte wurdt oanjûn yn 'e figuerlegende en it boarnegegevensbestân.
Foar mear ynformaasje oer it stúdzjeûntwerp, sjoch de gearfetting fan it Natural Portfolio Report dy't by dit artikel heart.
Massespektrometryproteomikagegevens binne bydroegen oan it ProteomeXchange-konsortium fia de PRIDE66-partnerrepository mei datasetidentifikator PXD046004. Alle oare gegevens dy't tidens dizze stúdzje binne krigen, wurde presintearre yn 'e Oanfoljende Ynformaasje, Oanfoljende Databestannen en Raw Databestannen. Boarnegegevens wurde foar dit artikel levere.
Pleatsingstiid: 8 novimber 2024