Plant- en patogeenmaterialen
In sorghum-assosiaasjekarteringspopulaasje bekend as de sorghumkonverzjepopulaasje (SCP) waard levere troch Dr. Pat Brown oan 'e Universiteit fan Illinois (no oan UC Davis). It is earder beskreaun en is in samling ferskate linen dy't konvertearre binne nei fotoperioade-ûngefoelichheid en lytsere statuer om de groei en ûntwikkeling fan 'e planten yn Amerikaanske omjouwings te fasilitearjen. 510 linen út dizze populaasje waarden brûkt yn dizze stúdzje, hoewol fanwegen minne kimen en oare kwaliteitskontrôleproblemen net alle linen waarden brûkt yn 'e analyze fan alle trije eigenskippen. Uteinlik waarden gegevens fan 345 linen brûkt foar de analyze fan 'e chitine-reaksje, 472 linen foar de flg22-reaksje, en 456 foar TLS-resistinsje.B. cookeistam LSLP18 waard krigen fan Dr. Burt Bluhm oan 'e Universiteit fan Arkansas.
MAMP-antwurdmjitting
Twa ferskillende MAMP's waarden brûkt yn dizze stúdzje flg22, (Genscript katalogus # RP19986), en chitine. Sorghumplanten waarden groeid yn ynfoegsels lein op flakken fol mei boaiem (33% Sunshine Redi-Earth Pro Growing Mix) yn 'e kas. Planten waarden de dei foar it sammeljen fan stekproeven wetterd om ekstra blêdfocht op 'e dei fan it sammeljen te foarkommen.
De linen waarden willekeurich tawiisd en, om logistike redenen, yn batches fan 60 linen plante. Foar elke line waarden trije 'potten' plante mei twa siedden per line. Folgjende batches waarden plante sa gau as de foarige batch ferwurke wie oant de hiele populaasje beoardiele wie. Twa eksperimintele runs waarden útfierd foar beide MAMP's mei genotypes opnij willekeurich yn elk fan 'e twa runs.
ROS-assays waarden útfierd lykas earder beskreaun. Koartsein, foar elke line waarden seis siedden yn 3 ferskillende potten plante. Fan 'e resultearjende siedlingen waarden trije selektearre op basis fan uniformiteit. Siedlingen dy't der ûngewoan útsagen of signifikant heger of koarter wiene as de mearderheid waarden net brûkt. Fjouwer blêdskiven fan 3 mm diameter waarden útsnien út it breedste diel fan it 4e blêd fan trije ferskillende 15 dagen âlde sorghumplanten. Ien skiif per blêd fan twa planten en twa skiven fan ien plant, wêrby't de twadde skiif de wetterkontrôle waard (sjoch hjirûnder). De skiven waarden yndividueel driuwend op 50 µl H20 yn in swarte 96-wells plaat, fersegele mei in aluminium seal om bleatstelling oan ljocht te foarkommen, en oernachtich by keamertemperatuer bewarre. De oare moarns waard in reaksjeoplossing makke mei 2 mg/ml chemilumineszinte sonde L-012 (Wako, katalogus # 120-04891), 2 mg/ml mierikswortelperoxidase (Type VI-A, Sigma-Aldrich, katalogus # P6782), en 100 mg/ml Chitine of 2 μM Flg22. 50 µl fan dizze reaksjeoplossing waard tafoege oan trije fan 'e fjouwer putten. De fjirde putte wie in mockkontrôle, wêr't de reaksjeoplossing sûnder de MAMP oan tafoege waard. Fjouwer lege putten mei allinich wetter waarden ek yn elke plaat opnommen.
Nei it tafoegjen fan 'e reaksjeoplossing waard de luminesinsje metten mei in SynergyTM 2 multi-deteksje mikroplaatlêzer (BioTek) elke 2 minuten foar 1 oere. De plaatlêzer docht elke 2 minuten luminesinsjemjittingen yn dizze oere. De som fan alle 31 lêzingen waard berekkene om de wearde foar elke put te jaan. De skatte wearde foar de MAMP-antwurd foar elk genotype waard berekkene as (gemiddelde luminesinsjewearde fan 'e trije eksperimintele putten - de mock-putwearde) - minus de gemiddelde lege putwearde. De lege putwearden wiene konsekwint tichtby nul.
Blêdskiven fanNicotiana benthamiana, ien heechresponsive sorghumline (SC0003), en ien leechresponsive sorghumline (PI 6069) waarden ek opnommen as kontrôles yn elke 96-putplaat foar kwaliteitskontrôledoelen.
B. cookeitarieding fan inokulum en yninting
B. cookeiInokulum waard taret lykas earder beskreaun. Koartsein, sorghummearn waarden trije dagen yn wetter wekke, spield, yn 1L konyske flessen skept en in oere autoklavearre by 15psi en 121 °C. De kerrels waarden doe ynint mei sawat 5 ml maserearre mycelia út in farske kultuer fanB. cookeiLSLP18-isolaten en 2 wiken by keamertemperatuer litten, wêrby't de flessen elke 3 dagen skodde waarden. Nei 2 wiken waarden de mei skimmels besmette sorghumkerrels oan 'e loft droege en doe opslein by 4 °C oant fjildinokulaasje. Itselde inokulum waard brûkt foar de hiele proef en elk jier farsk makke. Foar ynokulaasje waarden 6-10 besmette kerrels yn 'e krans fan 4-5 wiken âlde sorghumplanten pleatst. De spoaren produsearre troch dizze skimmels inisjearren ynfeksje yn 'e jonge sorghumplanten binnen in wike.
Sied tarieding
Foar it plantsjen yn it fjild waard sorghumsied behannele mei in mingsel fan fungicide, ynsektizid en safener dat ~ 1% Spirato 480 FS fungicide, 4% Sebring 480 FS fungicide, en 3% Sorpro 940 ES siedsafener befette. Dêrnei waarden de siedden 3 dagen oan 'e loft droege, wêrtroch't in tinne laach fan dizze miks om 'e siedden hinne ûntstie. De safener makke it gebrûk fan it herbicide Dual Magnum mooglik as in pre-emergency behanneling.
Evaluaasje fan wjerstân tsjin doelblêdflekken
De SCP waard plante by it Central Crops Research Station yn Clayton, NC op 14-15 juny 2017 en 20 juny 2018 yn in randomisearre folslein blokûntwerp mei twa eksperimintele replikaasjes yn elk gefal. Eksperiminten waarden plante yn ienkele rigen fan 1,8 m mei in rigebreedte fan 0,9 m mei 10 siedden per perseel. Twa rânerigen waarden om 'e periferie fan elk eksperimint plante om râne-effekten te foarkommen. De eksperiminten waarden yninte op 20 july 2017 en 20 july 2018, wêrnei't de sorghumplanten yn groeistadium 3 wiene. Beoardielingen waarden nommen op in skaal fan ien oant njoggen, wêrby't planten dy't gjin tekens fan sykte lieten sjen, waarden skoard as in njoggen en folslein deade planten waarden skoard as ien. Twa wurdearrings waarden nommen yn 2017 en fjouwer mjittingen yn 2018, begjinnend twa wiken nei yninte elk jier. sAUDPC (standerdisearre gebiet ûnder de sykteprogresjekurve) waard berekkene lykas earder beskreaun.
Pleatsingstiid: 1 april 2021