Planten en pathogene materialen
In sorghum feriening mapping befolking bekend as de sorghum konverzje befolking (SCP) waard levere troch Dr Pat Brown oan de Universiteit fan Illinois (no by UC Davis).It is earder beskreaun en is in kolleksje fan ferskate rigels omboud ta fotoperioade-ûngefoelichheid en lytsere statuer om de groei en ûntwikkeling fan planten yn Amerikaanske omjouwings te fasilitearjen.510 rigels fan dizze populaasje waarden brûkt yn dizze stúdzje, hoewol troch minne kieming en oare kwaliteitskontrôleproblemen, net alle rigels waarden brûkt yn 'e analyze fan alle trije eigenskippen.Uteinlik waarden gegevens fan 345-rigels brûkt foar de analyze fan 'e chitin-antwurd, 472-rigels foar de flg22-antwurd, en 456 foar TLS-resistinsje.B. cookeistam LSLP18 waard krigen fan Dr.. Burt Bluhm oan 'e Universiteit fan Arkansas.
MAMP antwurd mjitting
Twa ferskillende MAMPs waarden brûkt yn dizze stúdzje flg22, (Genscript catalogue # RP19986), en chitin.Sorghumplanten waarden groeid yn ynserts lein op flats fol mei boaiem (33% Sunshine Redi-Earth Pro Growing Mix) yn 'e kas.Planten waarden de dei foar it sammeljen fan monsters wettere om ekstra blêdfocht te foarkommen op 'e dei fan kolleksje.
De rigels waarden willekeurich makke en, om logistike redenen, waarden plante yn batches fan 60 rigels.Foar elke rigel waarden trije 'potten' plante mei twa sieden per rigel.De folgjende batches waarden plante sa gau as de foarige batch wie ferwurke oant de hiele populaasje waard beoardiele.Twa eksperimintele runs waarden útfierd foar beide MAMP's mei genotypen opnij willekeurich yn elk fan 'e twa runs.
ROS-assays waarden útfierd lykas earder beskreaun.Koartsein, foar elke rigel waarden seis siedden yn 3 ferskate potten plante.Fan 'e resultearjende seedlings waarden trije selekteare op basis fan uniformiteit.Seedlings dy't ûngewoan seagen of signifikant heger of koarter wiene as de mearderheid waarden net brûkt.Fjouwer blêdskiven fan 3 mm diameter waarden út it breedste diel fan it 4e blêd fan trije ferskillende 15-dagen âlde sorghumplanten ôfsnien.Ien skiif per blêd fan twa planten en twa skiven fan ien plant, wêrby't de twadde skiif de wetterkontrôle wurdt (sjoch hjirûnder).De discs waarden yndividueel float op 50 µl H20 yn in swarte 96-well plaat, fersegele mei in aluminium seal om bleatstelling oan ljocht te foarkommen, en oernacht by keamertemperatuer hâlden.De oare moarns waard in reaksje-oplossing makke mei 2 mg / ml chemiluminescent probe L-012 (Wako, katalogus # 120-04891), 2 mg / ml mierikswortelperoxidase (Type VI-A, Sigma-Aldrich, katalogus # P6782), en 100 mg / ml Chitin of 2 μM fan Flg22.50 µl fan dizze reaksje oplossing waard tafoege oan trije fan de fjouwer putten.De fjirde put wie in mock-kontrôle, wêrby't de reaksje-oplossing útsein de MAMP waard tafoege.Fjouwer lege putten mei allinnich wetter waarden ek opnommen yn elke plaat.
Nei it tafoegjen fan de reaksjeoplossing waard de luminescinsje mjitten mei SynergyTM 2 multi-deteksje mikroplatelêzer (BioTek) elke 2 min foar 1 oere.De plaatlêzer nimt luminescinsjemjittingen elke 2 min yn dizze 1 h.De som fan alle 31 lêzingen waard berekkene om de wearde foar elke put te jaan.De rûsde wearde foar de MAMP-antwurd foar elke genotyp waard berekkene as (gemiddelde luminescinsjewearde fan 'e trije eksperimintele putten - de mock-wellwearde) -minus de gemiddelde lege boarnewearde.De lege putwearden wiene konsekwint tichtby nul.
Leaf skiven fanNicotiana benthamiana, ien hege responsive sorghum line (SC0003), en ien low responsive sorghum line (PI 6069) waarden ek opnommen as kontrôles yn elke 96-well plaat foar kwaliteit kontrôle doelen.
B. cookeiinoculum tarieding en ynokulaasje
B. cookeiinoculum waard taret lykas earder beskreaun.Koartsein, sorghum kerrels waarden trije dagen yn wetter weagje, spield, skodde yn 1L konyske kolven en autoklave foar in oere by 15psi en 121 °C.De korrels waarden dan ynokulearre mei sa'n 5 ml macerated mycelia út in frisse kultuer fanB. cookeiLSLP18 isolearret en liet foar 2 wiken by keamertemperatuer, skodzje de flessen elke 3 dagen.Nei 2 wiken waarden de fungus besmette sorghum korrels loftdroege en dêrnei opslein by 4 ° C oant fjildinokulaasje.Itselde inoculum waard brûkt foar de hiele proef en makke elk jier farsk.Foar ynokulaasje waarden 6-10 besmette kerrels pleatst yn 'e holle fan 4-5 wiken âlde sorghumplanten.De sporen produsearre út dizze skimmels inisjearre ynfeksje yn de jonge sorghum planten binnen in wike.
Seed tarieding
Foar it plantenjen yn it fjild waard sorghum sied behannele mei in fungicide, insecticide, en safener-mingsel mei ~ 1% Spirato 480 FS fungicide, 4% Sebring 480 FS fungicide, 3% Sorpro 940 ES siedbefeiliger.Dêrnei waarden de sieden foar 3 dagen oan 'e loft droege dy't in tinne coating fan dizze ming om' e sieden levere.De safener tastien it brûken fan it herbizid Dual Magnum as in pre-opkomst behanneling.
Evaluaasje fan Target Leaf Spot ferset
De SCP waard plante op it Central Crops Research Station yn Clayton, NC op 14-15 juny 2017 en 20 juny 2018 yn in willekeurich folslein blokûntwerp mei twa eksperimintele replikaasjes yn elk gefal.Eksperiminten waarden plante yn 1,8 m inkele rigen mei in 0,9 m rige breedte mei 10 sied per plot.Twa grins rigen waarden plante om de perifery fan elk eksperimint te kommen râne effekten.De eksperiminten waarden ymportearre op 20 july 2017 en 20 july 2018, op hokker punt de sorghumplanten yn groeistadium 3 wiene. Wurdearrings waarden nommen op in skaal fan ien oant njoggen, wêrby't planten dy't gjin tekens fan sykte sjen litte waarden skoare as in njoggen en folslein deade planten waarden as ien skoard.Twa wurdearrings waarden nommen yn 2017 en fjouwer lêzingen yn 2018 begjinnend twa wiken nei yninting elk jier.sAUDPC (standerdisearre gebiet ûnder sykteprogressionskurve) waard berekkene lykas earder beskreaun.
Post tiid: Apr-01-2021